9 Tips untuk Elisa Kit assay

9 Tips untuk ELISA kit Assay

Dengan pemikiran ini, berikut adalah daftar tip untuk mendapatkan data berkualitas tinggi oleh ELISA, sebuah metode yang memungkinkan kuantifikasi penanda / protein yang diinginkan dalam sampel biologis, yang dapat sangat menguntungkan bila dibandingkan dengan metode kualitatif lainnya seperti IHC, Western blotting dll. Mereka juga dapat berfungsi sebagai format uji ortogonal untuk metode lain seperti tes aktivitas atau Western blotting untuk mendukung lebih lanjut dan meningkatkan hasil penelitian yang dilaporkan sebelumnya. Daftar saran ini didasarkan pada pengalaman bertahun-tahun tidak hanya mengembangkan tes dan memastikan konsistensi yang banyak terhadap produk kami, namun juga pada solusi yang kami tawarkan kepada para periset setiap hari untuk membantu mereka memperoleh yang paling akurat, konsisten. dan data yang dapat direproduksi untuk tes ELISA

1. Konsistensi adalah kunci untuk setiap pengujian

Sementara konsistensi mungkin tampak seperti tujuan tertentu dan jelas, ada beberapa asumsi kecil yang secara polos dapat mempengaruhi konsistensi antara piring yang dijalankan dalam pengujian. Seringkali, salah satu asumsi kecil itu adalah bahwa banyak pencampuran, untuk melestarikan reagen, aman dilakukan. Sebenarnya, Anda seharusnya tidak pernah mencampur komponen antara banyak kit. Setiap pengujian sangat spesifik dan dirancang untuk memberi Anda tingkat kinerja yang ditetapkan saat digunakan sebelum tanggal kadaluarsa yang ditetapkan. Jika Anda mencampur banyak, Anda mungkin secara tidak sengaja memperkenalkan pereaksi yang mungkin terdegradasi sehingga menghasilkan hasil pengujian yang kurang optimal atau tidak efektif. Konsistensi lot ke lot antara uji coba juga dapat dipastikan dengan secara konsisten menangani reagen uji, berikut tindakan pencegahan setiap saat, dan memastikan untuk mematuhi waktu inkubasi yang diberikan. Intinya, konsistensi harus diperkenalkan di mana saja dan di mana saja mungkin untuk data terbaik dan paling korelatif. Jeda dalam konsistensi bisa berarti hasil yang kurang akurat untuk satu lempeng versus yang lain dan bila Anda menggunakan sampel dari sumber / studi yang sama, ini akhirnya dapat menyebabkan data yang bertentangan dan sulit dijelaskan.

2. Upayakan untuk reproduktifitas

Bagi pengguna ELISA, reproduktifitas akan memberi kemudahan pada kehandalan. Reprodusibilitas dapat dipengaruhi oleh penanganan yang tidak tepat atau persiapan yang tidak konsisten dari reagen kit atau bahkan sampel. Penting untuk memastikan bahwa semua reagen kit ada pada suhu kamar selama kurang lebih 30 menit sebelum setiap pengujian. Banyak reagen mengandung komponen bergantung suhu yang mungkin keluar dari larutan saat dingin. Menggunakan pereaksi pada suhu kamar memastikan bahwa Anda memiliki kinetika pengikat yang konsisten dan pengembangan warna yang konsisten dari satu pengujian ke pengujian lainnya. Perubahan suhu dapat mempengaruhi perilaku uji, yang pada gilirannya dapat menyebabkan kurangnya reproduktifitas pada data Anda. Berjuang untuk reproduktifitas juga penting dalam menangani sampel. Sampel harus selalu dikelola dan ditangani oleh peneliti dengan cara yang sangat konsisten. Hal ini dapat dilakukan dengan memperkenalkan protokol koleksi sampel yang konsisten, meminimalkan siklus pencairan beku, dan mengoptimalkan pengenceran untuk kelompok sampel Anda dalam pengujian sebelumnya, sehingga Anda dapat yakin bahwa sebagian besar sampel Anda harus jatuh paling lambat. bagian dari kurva standar.

3. Pastikan akurasi assay

Tingkatkan ketepatan dengan memastikan Anda memiliki duplikat untuk semua poin dalam pengujian termasuk sumur latar, standar dan sampel. Ini hanya praktik lab yang baik untuk menjalankan tiruan untuk semua poin; ini akan memungkinkan Anda untuk segera melihat adanya outlier jelas yang mungkin mempengaruhi rata-rata Anda. Misalnya, jika Anda memiliki masalah pipetting yang tidak disengaja dengan n = 1 sampel Anda dengan baik dalam pengujian Anda, ini pasti akan mempengaruhi OD, yang pada gilirannya akan mempengaruhi rata-rata yang dihitung yang mengarah ke interpolasi yang tidak akurat dari kurva untuk sampel tertentu. . Data yang lebih akurat tentu saja penting bagi semua peneliti sehingga mereka dapat benar-benar yakin akan data mereka dan dapat menyesuaikan data mereka secara lebih tegas dengan temuan serupa lainnya.

4. Hindari kontaminasi

Memiliki koefisien variabilitas rendah (% CV) antara replikasi sampel Anda adalah kunci keberhasilan tes yang berhasil dan berjalan dengan baik. Jaga% CV antara duplikat rendah dengan menggunakan tip pipet segar untuk setiap penambahan pada pengujian. Tip baru bisa mencegah kontaminasi silang antara sumur, yang pada gilirannya bisa menjaga background dan% CVs rendah dan meningkatkan reliabilitas data. Juga, tidak disarankan untuk menuangkan reagen dari reservoir ke dalam botol asli karena hal ini secara tidak sengaja dapat menyebabkan kontaminasi juga. Tidak semua orang mengambil waktu untuk menghitung atau meninjau% CV mereka untuk pengujian mereka namun dapat sangat membantu dalam mengukur konsistensi dan reliabilitas.

5. Menghasilkan kurva standar yang andal

Untuk kurva standar yang paling dapat direproduksi, pastikan untuk melarutkan kurva dengan menggunakan rentang yang ditunjukkan dalam manual uji. Menambahkan titik ke kedua ujung kurva tidak akan meningkatkan sensitivitas dan tidak akan membiarkan kit mendeteksi konsentrasi yang lebih tinggi pula. Asimtot atas dan bawah kurva dibatasi oleh karakteristik unik dari antibodi yang digunakan untuk menghasilkan ikatan pada pelat dalam pengujian dan melebarkan kurva tidak akan mengubah batasan tersebut. Juga, perlu diingat bahwa penting untuk membuat kurva standar segar untuk setiap pengujian / lempeng. Sebagian besar pengujian menunjukkan batas waktu yang disarankan di mana kurva standar yang baru disiapkan harus digunakan. Sangat penting untuk mengikuti semua rekomendasi dan tindakan pencegahan seputar persiapan kurva standar.

6. Jelaskan analisis sampel yang akurat

Untuk analisis sampel yang paling akurat, sangat penting bagi setiap pengguna akhir untuk mengoptimalkan pengenceran untuk sampel unik mereka untuk tingkat penanda biologis yang terdeteksi dapat bervariasi karena dapat menimbulkan efek interferensi matriks potensial. Oleh karena itu, penting untuk tidak hanya memastikan bahwa Anda jatuh ke tempat yang aman pada kurva standar dengan populasi sampel Anda, namun penting juga untuk memastikan Anda memiliki linieritas dilisensi dengan menggunakan pengenceran sampel Anda. Bahkan jika ada rasio pengenceran yang direkomendasikan untuk matriks sampel yang mungkin digunakan peneliti, masih penting bagi setiap peneliti untuk mengoptimalkan rasio pengenceran mereka untuk sampel mereka dengan menggunakan rekomendasi protokol kit hanya sebagai panduan. Terkadang ekstraksi, pengenceran tambahan, dan lain-lain dapat diperlukan untuk beberapa sampel dan hanya dengan optimasi pengenceran ini, persyaratan potensial ini harus ditentukan sebelumnya. Beberapa peneliti meremehkan pentingnya proses pengoptimalan ini dan dalam beberapa kasus, berakhir dengan data sampel yang tidak linier, jatuh dari kurva, atau terlalu bervariasi sehingga membuat data pada dasarnya tidak dapat digunakan.

7. Pastikan untuk menyertakan semua latar belakang dan kontrol yang disarankan dengan baik di dalam protokol

Untuk memastikan pengujian Anda berhasil dengan baik dan untuk memungkinkan pemecahan masalah yang tepat sebaiknya muncul masalah, penting untuk menyertakan semua sumur latar yang disarankan dalam pengujian Anda. Beberapa tes mungkin memerlukan beberapa sumur kontrol atau sumur latar belakang dan semuanya berfungsi dengan sedikit berbeda. Jika Anda tidak jelas tentang sumur dan sumur kontrol latar belakang tertentu yang digunakan dalam pengujian, pastikan untuk menghubungi technical support untuk klarifikasi.

8. Gunakan pengencer dan penyangga yang disediakan / direkomendasikan

Untuk hasil terbaik, Anda hanya ingin menggunakan pelarut yang direkomendasikan hanya untuk kurva standar dan preparasi sampel Anda. Selama pengembangan uji, produsen mengidentifikasi kondisi optimal agar tidak hanya kinerja kurva namun juga deteksi sampel. Deterjen, kekuatan ion, pH dll semua bisa memainkan peran penting dalam menemukan lingkungan yang paling kondusif untuk tes yang menyenangkan. Setelah rekomendasi pengencer, oleh karena itu, selalu sangat dianjurkan untuk mendapatkan hasil terbaik.

9. Ikuti waktu inkubasi yang disarankan, suhu dan kondisi

Untuk mencapai pengembangan warna yang lengkap, pastikan untuk mematuhi pedoman inkubasi yang ditunjukkan dalam manual uji. Suhu, waktu, dan gemetar (jika diperlukan atau tidak dianjurkan) dapat sangat mempengaruhi status pengujian jika tidak diikuti. Memotong waktu inkubasi singkat dapat mencegah segala sesuatunya menuju ekuilibrium sebelum beralih ke langkah berikutnya dalam pengujian dan perubahan suhu yang besar juga dapat mempengaruhi kinetika yang mengikat. Jika gemetar disarankan, sebaiknya mengikuti panduan itu juga karena dalam beberapa pengujian, hal itu membuat perbedaan tawaran pada OD yang dihasilkan. Akurasi dan konsistensi penanganan selama inkubasi piring benar-benar dapat membantu meningkatkan kinerja uji. kami juga menediakan elisa kit untuk penelitian di Indonesia.

Untuk informasi silahkan email kami

info@labkita.com

+62 21 2246 8411

 

artikel terkait : Ferritin Test

Sumber : enzo life science